LCMSMS和LCMS定量分析的幾個(gè)問(wèn)題

LC-MS-MS如何用內標定量分析？

Q：本人現在用三重四極桿LC-MS-MS定量分析目標物，但是沒(méi)有標準品。內標法該具體怎么操作呢？資料說(shuō)先配制一定重量比的待測組分和內標樣品的混合物做色譜分析，測量峰面積，做重量比和面積比的關(guān)系曲線(xiàn)，此曲線(xiàn)即為標準曲線(xiàn)，如果這樣的話(huà)，沒(méi)有標準品怎么辦？

方法一：

1、內標法進(jìn)行定量分析，同樣需要待測物標準品。如果沒(méi)有待測物標準品就不能準確測量其含量，因為無(wú)法繪制標準曲線(xiàn)。

2、沒(méi)有待測物標準品不能準確測量其含量，但可以通過(guò)加入內標的方法測量待測物的相對含量，可以比較待測物在各樣品中的多少及相差倍數。

3、用LC-MS-MS做定量一般都采用MRM的掃描方式，你沒(méi)有待測物標準品，就無(wú)法建立和優(yōu)化MRM掃描的質(zhì)譜參數，這樣你只能使用FULL SCAN或SIM的掃描方法。沒(méi)有待測物標準品，你也無(wú)法準確得到待測物在LC上的保留時(shí)間，如果你的樣品中有與待測物相似質(zhì)量數的化合物，你得到的色譜峰就不會(huì )很純凈，會(huì )對你判定那個(gè)是你的待測化合物產(chǎn)生干擾。

方法二：沒(méi)有標準品，就只用面積相對定量。然后選用LC-MS-MS的SIM模式（樣品雜質(zhì)比較少，選擇同位素豐度為*的分子量，上下增減0.2）?？疾煲蛩貙е碌牧康母淖儽容^微量，選擇一種物質(zhì)為回收率指示物（反應液前處理前加入），一種物質(zhì)為內標物（前處理后、液相小瓶中進(jìn)樣測試前，在待測樣品中加入定量的內標物，然后進(jìn)行測試）。

LC-MS可以進(jìn)行定量分析嗎？

Q：請問(wèn)液質(zhì)聯(lián)用中質(zhì)譜跑出來(lái)用于定性的圖譜是什么樣的，既然是用質(zhì)譜來(lái)進(jìn)行定量的話(huà)，那色譜本身配置的紫外檢測器跑出來(lái)的圖譜用于何用？液質(zhì)聯(lián)用有SIM和全掃描的，那么一般在藥物代謝動(dòng)力學(xué)試驗中一般用哪一種呢？尤其是在對體內藥物分析時(shí)，內標法用于定量的質(zhì)譜圖是什么樣的？

質(zhì)譜定量分析，使用的一般是LC-MS/MS,不使用LC-MS, 看一下質(zhì)荷比，推測下分子量。UV可以用來(lái)定量，但是在有紫外吸收的干擾峰的時(shí)候，定量是不準的。LC-MS/MS使用母離子/子離子來(lái)進(jìn)行定量，相對來(lái)說(shuō)，干擾要少的多，也比較準確，在PK/TK的應用很廣泛。這里只有LC-MS/MS定量的譜圖，僅供參考！

183.1/141.3 通道的是內標，其他的兩個(gè)是化合物。

質(zhì)譜定量中已經(jīng)被廣泛接受的方式是MS/MS定量。這種定量常通過(guò)三重四極桿或離子阱質(zhì)譜實(shí)現。要求使用MS/MS的原因是：許多化合物有同樣的質(zhì)量。當使用Di一個(gè)維度即單級質(zhì)譜MS去定量時(shí)，也會(huì )缺乏特異性，尤其是對于像血液那樣的復雜的基質(zhì)。Di二個(gè)維度的MS（即MS/MS）在大多數情況下，能夠提供wei一的斷裂。合并特異的母離子質(zhì)量和wei一的碎片離子信息，可以選擇性地監測被定量的化合物。

LC-MS-MS定量分析實(shí)例

用LC-Q-TOF-MS 來(lái)做代謝組學(xué)，因為是樣品是體液含有多種化合物，想加入內標后先進(jìn)行一個(gè)相對的定量來(lái)判斷含量發(fā)生變化的化合物，怎樣去定量？用總離子流圖好像不合適，如果利用峰面積進(jìn)行相對定量的話(huà)，用哪個(gè)圖比較合適？得用標準品才能定性嗎？

LC-MS-MS定量分析使用SIM 或MRM模式。*的MRM更為準確。SIM使用Q選擇性的濾過(guò)選中的分子量。但是分子量相同的化合物很多，所以，如果樣品稍微復雜的話(huà)，SIM基本不合適。

MRM選擇母離子和子離子。使用Q過(guò)濾母離子，q 轟擊母離子，TOF過(guò)濾子離子，使子離子被檢測器檢測到。分子量相同，轟擊后產(chǎn)生的子離子不一樣的干擾離子就被排除了。所以，MRM模式是更為可靠的LC-MS定量分析方法。MRM檢測是離子對。

內標的選擇原理是結構基本和待測化合物類(lèi)似。結構相同或類(lèi)似，主要是為了滿(mǎn)足被離子化的效率與樣品類(lèi)似。這就是為什么很多都選擇使用該化合物或此類(lèi)化合物的氘代化合物。內標的選擇還要求其分子量與待測物質(zhì)不重合（還需要盡量避開(kāi)化合物的isotopic peak的m/z），并且可以和待測物質(zhì)分開(kāi)。

如果使用MRM, 樣品被分開(kāi)的話(huà)，那么理論上來(lái)說(shuō)總離子流圖上的每個(gè)峰都是代表一種物質(zhì)。同時(shí)使用MRM模式，如果樣品們的分子量與子離子不重疊，那么，即使在柱子中不被分開(kāi)的化合物，也是可以認為在MS中被分開(kāi)了。

液質(zhì)中幾個(gè)峰，MRM檢測到幾十個(gè)物質(zhì)就是多個(gè)物質(zhì)在同一時(shí)間從色譜柱跑出來(lái)了。雖然出峰時(shí)間一樣，但是每個(gè)化合物的peak應該是軟件中可以顯示出來(lái)的，只不過(guò)報道中由于篇幅有限，會(huì )被簡(jiǎn)略掉。

定性的話(huà)，需要標品，retention time 需要一致。

定量的話(huà)，需要先作標準曲線(xiàn)。