高效液相色譜在食品行業(yè)檢測應用的相關(guān)思考

高效液相色譜是檢測食品添加劑、污染物、真菌毒素等的主要檢測設備。提高液相色譜檢測水平、快速準確地完成檢測是液相色譜檢測工作者需要思考的基本問(wèn)題。本文通過(guò)剖析高效液相色譜法檢測經(jīng)常出現的問(wèn)題，提出了檢測分析的技術(shù)要點(diǎn)和控制措施，并對可疑的檢測結果進(jìn)行綜合分析，以提高高效液相色譜檢測技術(shù)水平，為從事高效液相色譜檢測工作的人員提供理論和實(shí)操參考。

1 高效液相色譜法檢測過(guò)程中存在的問(wèn)題

液相色譜檢測是以色譜峰的保留時(shí)間來(lái)進(jìn)行定性分析，同一物質(zhì)在同一色譜條件下應有相同的保留時(shí)間。但在實(shí)際食品添加劑檢測中經(jīng)常會(huì )遇到復雜基質(zhì)樣品，由于雜質(zhì)成分與待測化合物性質(zhì)相似或接近，就可能在色譜行為上表現一致，即使全按照檢測標準操作，也有各種因素干擾結果的準確性，對于這些峰，僅靠保留時(shí)間定性，容易出現漏檢、錯檢、數據不準確和檢測時(shí)間長(cháng)等問(wèn)題。①漏檢是不能檢出該檢的組分，特別是低含量和復雜的組分，如黃曲霉毒素，毒性大、含量低，容易漏檢。②錯檢是對檢測結果的誤判，得出錯誤結論，俗稱(chēng)“假陽(yáng)性”。③數據不準確是檢測數據遠遠偏離真值，甚至忽高忽低，不能真實(shí)反映出樣品內組分情況。④檢測時(shí)間長(cháng)是在檢測樣品多、指標多的情況下，從樣品進(jìn)入預處理到出具檢測報告的時(shí)間長(cháng)，甚至超過(guò)法定時(shí)限。因此，快速、準確地應用色譜分析來(lái)定性、定量目標物是檢測機構獲取準確、可靠的分析數據的關(guān)鍵。

2 高效液相色譜法檢測技術(shù)的質(zhì)量控制

2.1 樣品前處理

前處理包括取樣、制樣、提取和凈化。正確的樣品前處理是保障檢測數據科學(xué)、準確的第一步。不正確、不規范的預處理可能導致譜圖產(chǎn)生雜峰、詭峰，影響目標峰的分析。嚴格控制預處理過(guò)程，盡力減少雜峰，突出目標物，避免在目標物出峰位置有干擾峰，造成假陽(yáng)性的錯誤檢測結論。

取樣要有代表性，嚴格按照規程進(jìn)行混勻、縮分。①根據樣品狀態(tài)來(lái)制樣。固體要將其粉碎后再混勻；液體樣品制備前要搖勻；結晶樣品溶解后攪拌均勻，如有結晶析出的蜂蜜樣品，需將樣品的瓶蓋旋緊后置于水浴(溫度不超過(guò)60 ℃)中溫熱，待蜂蜜樣品全部溶化后攪勻、冷卻，再稱(chēng)取樣品，從而保證樣品性質(zhì)的一致性。②根據檢測項目的不同來(lái)制樣，如堅果炒貨食品，檢測污染物時(shí)需去殼處理，檢測添加劑時(shí)則需帶殼處理。

2.2 選擇合適的檢測方法

樣品的特性千差萬(wàn)別，選擇準確的檢測方法是保障結果準確的必要手段，這就需要結合產(chǎn)品特性，根據標準要求選擇合規、合理的檢測方法。此外，應及時(shí)關(guān)注最新出臺的標準，若有變更，則需按照變更后的檢測標準進(jìn)行環(huán)境、人員、設備和方法的驗證，確認具備實(shí)驗能力后，再按照變更的檢測方法進(jìn)行檢測。

2.3 對儀器、試劑進(jìn)行有效控制

2.3.1 對儀器的控制

為了保證儀器設備的日常使用和維護，檢驗室應制定儀器的管理人員，并明確職責。儀器的操作者必須通過(guò)培訓、考核后上崗，熟知儀器的工作性能、操作規程和安全指標。檢測儀器必須進(jìn)行計量檢定，檢定合格后，方能進(jìn)行檢測工作。通常要求在兩次檢定周期內至少開(kāi)展1次期間核查，針對使用頻率較高的儀器，儀器使用人員應增加核查頻次，監測儀器的準確性和穩定性，把控正常損耗對儀器檢測結果的影響。此外，做好儀器的日常維護，完成相關(guān)記錄。

2.3.2 對試劑的控制

實(shí)驗室要有試劑管理規程，并按要求分類(lèi)儲存，如避光、冷藏、有毒有害和易燃易爆等要有相應的儲存地點(diǎn)，并明示標簽。對于在使用或保管中的標準品需進(jìn)行期間核查，通過(guò)質(zhì)量控制保證標準品量值的準確可靠以及可溯源性。

2.4 優(yōu)化檢測環(huán)境

檢測環(huán)境條件對液相色譜檢測的準確性有重要影響，如環(huán)境溫度的不穩定會(huì )影響流動(dòng)相的黏度，導致保留時(shí)間發(fā)生變化，影響檢測結果的重現性。因此，做好日常監測和記錄，保證檢測環(huán)境符合檢測需求。同時(shí)，保持檢測環(huán)境的整潔，避免樣品間的交叉污染，有助于提高檢測效率。

2.5 提高檢測人員的操作水平

檢測員在檢測過(guò)程中應嚴格按照法律法規及標準規定，整個(gè)實(shí)驗過(guò)程都要保持科學(xué)嚴謹的工作態(tài)度，做到過(guò)程有記錄、結果可追溯。檢測機構應制定人員培訓計劃，持續有效的培訓有助于提升檢測人員的檢測水平。此外，實(shí)驗室應多組織檢測員參加外部的能力驗證和內部的質(zhì)量控制考核，通過(guò)盲樣考核、比對實(shí)驗、加標回收和留樣復測等手段確保檢測員具備相應的檢測能力。

2.6 檢測儀器的維護與保養

科學(xué)的維護和保養可延長(cháng)高效液相色譜儀的使用壽命、提高其運行效率。①?lài)栏癜凑找笠幏堕_(kāi)關(guān)機，開(kāi)機完畢后、開(kāi)始檢測前要進(jìn)行全面檢查，保證設備處于良好狀態(tài)，不會(huì )對檢測產(chǎn)生不良影響。關(guān)機時(shí)切忌亂丟亂放，以免在下次使用時(shí)出現誤差，影響檢測結果。②注意維護實(shí)驗室環(huán)境，不能僅在工作時(shí)保證適宜的溫度和濕度，即使不工作時(shí)也要關(guān)注實(shí)驗室的溫度和濕度變化，以免造成設備故障或檢測數據不穩定。

3 可疑結果的綜合分析

高效液相色譜檢測結果往往會(huì )出現數值不準確、錯檢(假陽(yáng)性)等情況，嚴格、規范地進(jìn)行預處理是保證檢測結果準確的基礎。遇到可疑樣品時(shí)，應考慮制樣是否完備，標準是否正確執行，前處理過(guò)程是否準確，判定是否合理。排除這些因素后，進(jìn)行可疑樣品復測，可采取以下手段進(jìn)一步確認。

3.1 調整色譜條件

有的樣品比較復雜，會(huì )出現雜質(zhì)峰，干擾結果判定，可通過(guò)調整流動(dòng)相比例，消除雜質(zhì)峰的影響，準確地進(jìn)行定性分析。例如，在檢測肉制品中的防腐劑時(shí)，按照《食品安全國家標準 食品中苯甲酸、山梨酸和糖精鈉的測定》(GB 5009.28—2016)的要求，流動(dòng)相為甲醇+乙酸銨，比例為5∶95，曾出現雜質(zhì)峰影響苯甲酸的定性，將流動(dòng)相甲醇+乙酸銨的比例調整為10∶90，雜質(zhì)峰偏離苯甲酸出峰位置，有效避免了苯甲酸的錯檢。

3.2 加標實(shí)驗

在樣品前處理時(shí)添加標準品，對比保留時(shí)間、色譜峰、色譜峰面積的變化，對可疑檢測數據進(jìn)行有效分辨。例如，在豆干樣品初測時(shí)檢出苯甲酸，根據《食品安全國家標準 食品添加劑使用標準》(GB 2760—2014)，豆干中不允許添加苯甲酸，因此需進(jìn)行樣品復測。通過(guò)重新制備樣，加標復測后，苯甲酸標液峰和干擾峰分離，判定初測為假陽(yáng)性。

3.3 使用二極管陣列檢測器檢測

通過(guò)保留時(shí)間和光譜信息圖進(jìn)行綜合定性。當保留時(shí)間附近有可疑色譜峰出現時(shí)，比較標準溶液光譜圖與樣品處理液光譜圖的重合性，能夠進(jìn)一步確證可疑色譜峰是否是目標待測物。例如，按照《食品安全國家標準 食品中苯甲酸、山梨酸和糖精鈉的測定》(GB 5009.28—2016)中的第一法——液相色譜法，采用二極管陣列檢測器對樣品中的苯甲酸進(jìn)行測定，分別采集色譜圖和光譜圖，將樣品處理液與標準溶液色譜圖進(jìn)行比較，以保留時(shí)間定性，若有檢出，則結合樣品與標準溶液光譜圖，從峰起點(diǎn)、峰頂點(diǎn)和峰落點(diǎn)再次確認。若樣品光譜圖與標準溶液的光譜圖全不重合，可確證樣品的檢出結果為假陽(yáng)性；若光譜圖全重合，可確證樣品為陽(yáng)性檢出。因此，結合保留時(shí)間和光譜圖進(jìn)行綜合分析判定，可有效保證樣品檢測結果的準確性和可靠性。

3.4 液質(zhì)聯(lián)用

由于受價(jià)格和耗材的限制，高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜設備沒(méi)有得到廣泛應用，但它的優(yōu)勢非常突出。它既能利用高效液相色譜對復雜化合物的分離能力，又綜合了高分辨率質(zhì)譜對化合物的準確定性和定量，能夠同時(shí)測定多種化合物，且分析結果的靈敏性和準確性都能得到保障。童蘭艷等采用高效液相色譜-質(zhì)譜法同時(shí)測定食品中的9種甜味劑(甜蜜素、安賽蜜、糖精鈉、阿斯巴甜、阿力甜、三氯蔗糖、甜菊糖苷、愛(ài)德萬(wàn)甜和紐甜)，與國家標準檢測方法相比，分離效果好、靈敏度高，明顯提高了檢測效率。

4 結語(yǔ)

食品檢測面臨著(zhù)新要求、新挑戰、新形勢，高效液相色譜技術(shù)憑借其準確性高、靈敏度好、分辨率高的優(yōu)勢被廣泛應用于農獸藥殘留、食品添加劑、非法添加物、霉菌毒素、氨基酸和糖類(lèi)檢測中，但因其操作要求高，未能廣泛普及，如很多市、縣檢測機構的高效液相色譜儀被閑置，沒(méi)能發(fā)揮出其應有的作用。

隨著(zhù)科學(xué)技術(shù)水平的提高，不管是國家檢測機構還是第三方檢測機構，都在不斷完善儀器檢測管理制度。在實(shí)際操作中正確運用高效液相色譜法的技術(shù)要點(diǎn)，使儀器的功能和特點(diǎn)更大限度地被發(fā)揮和利用，才能提高高效液相色譜技術(shù)的使用率和準確率，保證檢測結果的準確性，更好地監管食品安全，做到讓老百姓吃得放心。